性欧美在线视频免费观看丨亚洲色欲www综合网丨大香伊人久久丨中国xxxx做受视频丨在线观看中文字幕视频丨最近中文字幕在线观看丨国产网红av丨久久青草免费视频丨国产人免费人成免费视频丨国语对白做受69按摩丨午夜高清国产拍精品福利丨强开小婷嫩苞又嫩又紧视频韩国丨欧美日韩国产免费丨国产白丝精品91爽爽久丨欧美人交a欧美精品av一区丨波多野成人无码精品电影丨精品无码久久久久国产app丨亚洲熟女片嫩草影院丨色综合综合丨精品乱码一区内射人妻无码

 引言

      γH2AX 是染色體組蛋白H2A家族的成員之一。在各種理化因素刺激下，細胞DNA雙鏈發(fā)生斷裂，ATM、ATR等磷脂酰肌醇3-激酶使H2AX上的第139位絲氨酸發(fā)生磷酸化修飾，形成磷酸化的γH2AX 。γH2AX作為一種生物標志物可以清楚地反映DNA損傷程度和修復情況, 被國內(nèi)外廣泛應用于細胞凋亡研究中, 是細胞損傷應激反應的研究熱點之一。常見的γH2AX鑒定分析方法包括免疫發(fā)光法和質(zhì)譜法，但因復雜預處理過程會假陽性。因此原位實時檢測細胞核內(nèi)γH2AX對于準確評估遺傳毒性至關重要。SERS技術具備原位、無損、預處理簡單、高靈敏度等優(yōu)勢，有望用于γH2AX原位分析。但是，SERS檢測細胞核內(nèi)物質(zhì)仍面臨巨大挑戰(zhàn)。SERS增強效果與粗糙金屬尺寸相關，顆粒直徑越大，振蕩頻率和增強效果越好。進入細胞核內(nèi)需要穿過核孔，其限制直徑尺寸為10-30nm，粗糙金屬顆粒尺寸小導致SERS增強效果弱。在現(xiàn)有技術中，主要通過修改核定位序列實現(xiàn)主動運輸至細胞核來實現(xiàn)核內(nèi)檢測，該技術提高了進核效率，卻因基質(zhì)存在而產(chǎn)生背景干擾。

在本文中，南京師范大學王琛教授課題組構建了一種基于金納米粒子（GNPs）的小型免疫傳感器SERS探針，成功檢測受限靶點γH2AX，評估藥物遺傳毒性。作者利用γH2AX作為限制靶點的特性，構建了一種基于小尺寸（15nm）金納米探針的γH2AX免疫傳感器，并用TAT核靶向肽對其進行了修飾，以確保高的核進入效率。一旦DNA損傷被誘導，γH2AX的局部過表達通過免疫識別進一步募集探針，從而可以原位組裝熱點，將增強拉曼信號用于遺傳毒性檢測。本研究提出了一種研究提出了一種新的SERS檢測受限靶誘導的尺寸轉(zhuǎn)換和熱點形成的方法，用于分析核內(nèi)遺傳毒性標志物。該技術的優(yōu)點在于簡化了SERS探針的結(jié)構和操作過程，避免了對含有熱點的系統(tǒng)的額外設計，從而減少了背景信號，從而為在單個活細胞水平上原位實時檢測核內(nèi)靶標提供了參考。

結(jié)果分析

作者利用γH2AX作為限制靶點的特性，構建了一種基于小尺寸（15nm）金納米探針的γH2AX免疫傳感器，探針以4-巰基芐腈（4-MBN）修飾的15nm GNPs為增強顆粒，PEG2000為穩(wěn)定鏈，TAT為穿透肽，γH2AX單克隆抗體為探測識別物，建立為抗-γH2AX@GPMT的SERS傳感器。

實驗時通過TAT穿透肽的小顆粒和核靶向功能進入細胞核，將構建的SERS細胞傳感器與藥物一起孵育。若藥物沒有遺傳毒性探針以分散狀態(tài)分布，拉曼信號弱。相反，如果藥物具有遺傳毒性發(fā)生DNA損傷，產(chǎn)生γH2AX的局部表達，誘導探針進一步免疫識別和聚集，在原位構建增強熱點，產(chǎn)生高強度拉曼信號實現(xiàn)遺傳毒性鑒定。

圖1 （A）抗-γH2AX@GPMT制備原理圖；（B） GNPs的ζ電勢圖；（C）不同GNPs紫外-可見光譜圖；（D）不同基質(zhì)拉曼光譜圖（1592cm^-1和2230 cm^-1是4-MBN特征峰）；（E）抗-γH2AX@GPMT的TEM圖像；(F) anti-γH2AX@GPMT的EDX圖

圖2 （A）抗-γH2AX@GPMT的檢測策略.（B）TAT修飾不同尺寸SERS基底Au尺寸分布（C）15nm抗-γH2AX@GPMT在2230 cm^?1處的暗場、明場和拉曼光譜圖（D）30 nm抗-γH2AX@GPMT在2230 cm^?1處的暗場、明場和拉曼光譜圖（E）MMS孵育前后SERS強度差值。（F）抗-γH2AX@GPMT的MMS平均需求量

圖3 （A）γH2AX靶點體外模擬方案略.（B） γH2AX尺寸與PH值關系（C）加入抗-γH2AX@GPMT.后實物圖（D）不同PH值孵育環(huán)境下，抗-γH2AX@GPMT的拉曼光譜。（E） 抗-γH2AX@GPMT在2230cm^-1拉曼強度與PH值關系。（F） 不同濃度的γH2AX肽孵育的抗-γH2AX@GPMT的拉曼光譜圖（G）抗-γH2AX@GPMT在2230cm^-1拉曼強度與γH2AX肽濃度關系

圖4 抗-γH2AX@GPMT的靶誘導機制.（A）加入γH2AX肽前后抗-γH2AX@GPMT的TEM圖像（B） 抗γ的生物TEM圖像H2AX@GPMTγH2AX孵育前后。（C）抗-γH2AX@GPMT拉曼光譜（D）抗-γH2AX@GPMT的2230 cm^?1拉曼光譜歸一化強度

圖5 SERS傳感器優(yōu)化和表征。（A）不同時間下細胞攝取抗-γH2AX@GPMT顯微圖像（B） 加入GNP和抗-γH2AX@GPMT后L02細胞活性（C）不同傳感器的CYP450代謝酶活性。

圖6（A）藥物遺傳毒性評價方案。（B） 在不同時間MMS孵育時間細胞暗場、明場和拉曼Mapping圖（2230 cm^?1峰位）。黃色實線區(qū)域為拉曼采集區(qū)。黃色虛線圓圈表示細胞核區(qū)域（C）在不同時間MMS孵育時間細胞暗場、明場和拉曼Mapping圖（2230 cm^?1峰位）。（D） 不同孵育時間下2230 cm^?1的拉曼平均強度

結(jié)論

本研究以γH2AX為細胞核內(nèi)定向靶點，突破了SERS探針進入細胞核效率和信號增強因子之間的局限性。構建了一種基于GNP探針的γH2AX免疫傳感器來評估藥物遺傳毒性。該傳感器具備TAT膜穿透性和核靶向功能，使小顆粒探針能夠穿過核孔并成功進入細胞核。該探針進入細胞核內(nèi)后，GTIs誘導DNA損傷和γH2AX局部過表達，導致原位構建增強熱點并產(chǎn)生強拉曼信號，進一步增強了探針的免疫識別性能，解決了小探針增強性能差和大探針入核效率差的矛盾難題。本文所設計SERS探針可原位分析細胞核內(nèi)遺傳毒性，為藥物遺傳毒性篩選提供了一種新方法，也為細胞核內(nèi)原位實時檢測提供了實驗靈感。

南京師范大學王琛教授課題組簡介

王琛，南京師范大學化學與材料科學學院教授，博士生導師，國家優(yōu)秀青年科學基金獲得者（2020年），江蘇省“青藍工程"優(yōu)秀青年骨干教師、中青年學術帶頭人；南京師范大學本科、碩士，2011年博士畢業(yè)于南京大學化學化工學院生命分析國家重點實驗室，2012-2016南京大學從事物理學博士后，2016-2017年麻省理工學院（MIT，美國）訪問學者。至今，在Angew. Chem. Int. Ed., Sci. China Chem., Nano lett., ACS Nano, Anal. Chem.等學術期刊發(fā)表研究論文60 余篇；參編英文圖書 《Nanobiosensors: From Design to Applications》(Wiley)；主持多項國家自然科學基金、江蘇省重點研發(fā)、江蘇省自然科學基金等項目；擔任Chinese Chemical Letters期刊編委，中國分析測試協(xié)會青年學術委員會委員，江蘇省材料學會副秘書長。

文章信息

本文以“Confined Target-Triggered Hot Spots for In Situ SERS Analysis of Intranuclear Genotoxic Markers"為題發(fā)表在Analytical Chemistry上，中國藥科大學韓凌飛為第一作者，南京師范大學王琛教授和中國藥科大學柳文媛教授為通訊作者。

本研究采用的是北京卓立漢光儀器有限公司RTS2 多功能激光共聚焦顯微拉曼光譜儀，如需了解該產(chǎn)品，歡迎咨詢。

免責說明

北京卓立漢光儀器有限公司公眾號所發(fā)布內(nèi)容（含圖片）來源于原作者提供或原文授權轉(zhuǎn)載。文章版權、數(shù)據(jù)及所述觀點歸原作者原出處所有，北京卓立漢光儀器有限公司發(fā)布及轉(zhuǎn)載目的在于傳遞更多信息及用于網(wǎng)絡分享。

如果您認為本文存在侵權之處，請與我們聯(lián)系，會第一時間及時處理。我們力求數(shù)據(jù)嚴謹準確，如有任何疑問，敬請讀者不吝賜教。我們也熱忱歡迎您投稿并發(fā)表您的觀點和見解。